NIBSC 19/304 SARS-CoV-2 RNA试剂(标准品)

1.有可能的使用

用于 SARS-CoV-2 RNA 的研究试剂旨在用于开发和评估基于核酸扩增技术 (NAT) 的检测方法，以检测 SARS-CoV-2 序列作为阳性对照。该材料需要提取。此材料仅供研究使用，并且仅在内部进行了表征。

2.内容

每个小瓶包含 0.5 mL、冷冻、非传染性合成 SARS-CoV 2 RNA，包装在 1 型人类免疫缺陷病毒中

(HIV-1) 颗粒在无菌通用缓冲液中配制，包含 10 mM Tris-HCl (pH 7.4)、0.5% 人血清白蛋白和 1% D-(+)-海藻糖脱水物。

3.警告

NIBSC 19/304 SARS-CoV-2 RNA试剂(标准品) 不适用于人类食物链中的人类或动物。

用于制备通用缓冲液的人血清白蛋白已经过测试，发现 HBsAg、抗 HIV

和 HCV RNA。与所有生物来源的材料一样，这种制剂应被视为对健康有潜在危害。它

应根据您自己实验室的安全程序使用和丢弃。此类安全程序应包括戴防护手套和避免产生气溶胶。打开安瓿或小瓶时应小心谨慎，

4.描述

用于制备研究试剂 19/304 的源材料是基于慢病毒载体 (LVV) 的质粒，其中 HIV 基因已使用 [1] 中描述的类似方法，用武汉-Hu-1 分离株 (GenBank MN908947.3) SARS-CoV-2 替代。

SARS-CoV-2 基因组已分为四个重叠片段并插入 LVV 的长末端重复序列中质粒。单核苷酸突变已随机插入 SARS-CoV-2 序列中以防止蛋白质表达。这四种构建体的序列已存入 GenBank：登录号 MT299802、MT299803、MT299804、MT299805。四种 LVV-SARS-CoV-2 构建体分别与 HIV-1 一起单独转染到 HEK293T/17 细胞中包装质粒 p8.9，由 D. Trono 教授捐赠 [2]。转染细胞上清液中含有的颗粒通过在 20% 蔗糖缓冲垫上超速离心纯化并重悬于通用缓冲液中。四个基因组中的每一个使用 SARS-CoV-2 序列上游 HIV-U5 区域的常见序列对粒子类型进行量化。一个四种颗粒的等摩尔混合物在通用缓冲液中配制，目标浓度为 107 拷贝/mL。

5.贮存

小瓶在收到时应存放在 -20℃ 或以下。避免冷冻/解冻循环。尚未对该材料进行稳定性研究。

6.材料的使用

NIBSC 19/304 SARS-CoV-2 RNA试剂(标准品)  在环境温度下解冻研究试剂。研究试剂应根据最终用户的方法进行处理，包括提取步骤。如果需要稀释系列，我们建议在提取前稀释材料。